Banca de DEFESA: Kelly Assis Rodrigues

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : Kelly Assis Rodrigues
DATA : 14/09/2022
HORA: 14:00
LOCAL: Videoconferência
TÍTULO:

"Avaliação da produção de lovastatina em Aspergillus sp., ácido hialurônico em Ogataea polymorpha e 2’-Fucosillactose em Kluyveromyces lactis"

PALAVRAS-CHAVES:

Fungo filamentoso; estatina; levedura; biopolímero, oligossacarídeo; leite humano

PÁGINAS: 144
RESUMO:

O uso de microrganismos para produção de biomoléculas, vem despertando cada vez mais o interesse comercial. Durante o desenvolvimento desse trabalho, três processos microbianos foram avaliados para produção de lovastatina e Ácido hialurônico e 2’Fucosillactose. A lovastatina é uma biomolécula produzida naturalmente por alguns fungos, com destaque para Aspergillus terreus. É uma molécula que atua como inibidor competitivo de uma enzima chave da via de colesterol, a 3-hidróxi-3-metil-glutaril-Coenzima A (HMG-CoA) redutase, contribuindo para a redução da hipercolesterolemia. Como o Brasil possui uma vasta biodiversidade, avaliou-se a produção de lovastatina em fungos do gênero Aspergillus isolados em território brasileiro, assim como a diversidade genômica destes fungos. Com isso identificou-se uma cepa, a URM 5961, que apresentou uma produção de 0,6 g/L e um alto grau de identidade genômica com a cepa referência, a ATCC 20542, que produz cerca de 1,0 g/L de lovastatina. O ácido hialurônico (AH), é um biopolímero produzido naturalmente por animais e alguns microrganismos. Por conta de suas características reológicas como viscosidade alta, higroscopicidade e biocompatibilidade, o AH é muito utilizado em tratamentos oftalmológicos, preenchimento facial e na formulação de cosméticos. A obtenção de AH de fontes naturais era originalmente a partir de tecido animal, como crista de galo ou, por bioprodução por bactérias patogênicas do gênero Streptococcus, mas estas fontes vêm sendo substituídas por produção heteróloga em outros microrganismos, como Bacillus subtilis. Como Ogataea polymorpha vem ganhando importância como organismo para expressão heteróloga, este trabalho se propôs a investigar seu potencial como hospedeira para a produção de AH. Para este fim, foram geradas três cepas, a EMB 102, EMB 103 e EMB 104, que se diferenciam quanto aos promotores utilizados para guiar os genes introduzidos. Confirmamos a capacidade de O. polymorpha de produzir AH, em que a cepa EMB 103 apresentou uma produção de de 0,8 mg/mL. Esses resultados abrem caminho para futuras investigações a fim de melhorar a produção desses compostos. A 2’Fucosillactose (2’FL) é um oligossacarídeo do leite humano (HMOs) constituídos por três monossacarídeos: glicose, galactose e fucos e corresponde a 80% do HMOs. A 2’FL possui atividade imunomodulatorio atuando nos processos inflamatórios diminuindo interações entre patógenos com a mucosa gastrointestinal em recém-nascidos. A cepa K2WΔSacII foi construída utilizando a levedura Kluyveromyces lactis onde foram inseridos os genes gmd e fcl de Escherichia coli e o gene WcfB de Bacteroides fragilis para que essa fosse capaz de produzir 2’FL usando como substrato lactose e hidrolisado da semente do açaí composto majoritariamente por manose. O objetivo desse trabalho foi caracterizar a cepas K2WΔSacII quanto a produção de 2’FL e melhorar essa produção pela disrupção do gene lac4 que codifica a β-galactosidase. Apesar de ainda não ter sido detectado a produção de 2’FL, foram identificados e corrigidos os possíveis motivos para que isso não tenha ocorrido, além disso foi realizado a disrupção do gene lac4, confirmado pelo fenótipo esperado da levedura, que é perder a capacidade de crescer em lactose como única fonte de carbono. Isso abre caminho para prosseguir com o projeto, visando a produção de 2’FL em K. lactis.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 1972136 - NADIA SKORUPA PARACHIN
Externa ao Programa - 2095134 - PATRICIA ALBUQUERQUE DE ANDRADE NICOLA
Externo à Instituição - ANTÔNIO MILTON VIEIRA GOMES - USP
Externa à Instituição - NADIELLE TAMIRES MOREIRA MELO UMPIERRE