Banca de QUALIFICAÇÃO: Luis Felipe Santos Menezes

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : Luis Felipe Santos Menezes
DATA : 09/12/2022
HORA: 14:00
LOCAL: Videoconferência
TÍTULO:

"Efeito de mutações associadas à epilepsia (I1596S, V1627M e L1650P) no funcionamento do canal Nav1.2 humano e caracterização eletrofisiológica do peptídeo Tst2, um modulador de canais Nav isolado do escorpião Tityus stigmurus".

PALAVRAS-CHAVES:

Epilepsia, Canal de sódio voltage dependente, patch-clamp, toxinas de escorpião e canalopatias.

PÁGINAS: 75
RESUMO:

A epilepsia é uma doença causada por atividade exagerada dos neurônios ou uma sincronia anormal do cérebro. Ela pode ser focal, generalizada ou desconhecida. Infecções (viral ou bacteriana no cérebro), doenças autoimunes, causas adquiridas, e mutações genéticas são as principais causas. Dentre as mutações, destaca-se mutações em canais iônicos voltagem dependentes (Na+ , K+ , Ca2+ e Cl- ). Na literatura, pode-se citar estudos relacionando epilepsia e mutações nos canais de sódio, como em uma família afetada por convulsão neonatal infantil benigna (BFNIS) que após análise genética foi identificada a mutação I1596S, o estudo relatando a mutação V1627M que está associada a epilepsia da infância com crises focais migratórias (EIMFS). Por fim, um estudo relatando um paciente com uma mutação no gene SCN2A (L1650P) descrita por estar relacionada a encefalopatia epiléptica infantil precoce (EIEE). Parte dos pacientes com epilepsia são resistentes a ação de fármacos, sendo necessário a busca por novas formas de tratamento como por exemplo, produtos naturais como compostos de peçonhas de escorpião. O objetivo desse projeto é avaliar o efeito de mutações associadas a epilepsia (I1596S, V1627M e L1650P) no funcionamento do canal Nav1.2 humano e a caracterização eletrofisiológica do peptídeo Tst2 da peçonha do escorpião Tityus stigmurus. A purificação e identificação do peptídeo foi feito por HPLC e MALDI-TOF/TOF. As mutações serão realizadas pelo kit de mutagênese sítio dirigida Quikchange II (Agilent Technologies) e as análises eletrofisiológicas feitas no modo whole-cell usando o amplificador EPC 10 Heka através do software PatchMaster. A purificação ocorreu em três etapas, sendo a eluição do peptídeo em 37,8% de acetonitrila na cromatografia de peçonha bruta. Ademais, a massa monoisotópica foi [M+H]+ 6985,74 Da. A caracterização eletrofisiológica (Nav1.1-Nav1.7) do peptídeo (100 nM) foi realizada. Para ativação, o canal mais afetado foi o Nav1.1 (com pré pulso) e Nav1.7 (sem pré pulso). Nav1.3 foi o mais afetado na inativação e Nav1.4 na recuperação da inativação. Não foram observadas alterações na inativação rápida de nenhum subtipo testado. Próximos passos: sequenciar parcialmente o peptídeo, realizar as mutações no canal Nav1.2, e analisá-las eletrofisiologicamente.

MEMBROS DA BANCA:
Externa à Instituição - LUCIANA MIDORI INUZUKA NAKAHARADA - SÍRIO
Externa à Instituição - CAROLINE BARBOSA FARIAS MOURAO - IFB
Externa à Instituição - LILIAN DOS ANJOS CARNEIRO - UNIEURO
Presidente - 1666182 - WERNER LEOPOLDO TREPTOW