Banca de DEFESA: Clara Luna Freitas Marina

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : Clara Luna Freitas Marina
DATA : 27/02/2023
HORA: 14:00
LOCAL: Meio virtual
TÍTULO:

Análise da Infecção Criptocócica Latente e da Reativação de Células Dormentes de Cryptococcus neoformans Associada ao Metabolismo Celular de Macrófagos

PALAVRAS-CHAVES:

Cryptococcus neoformans, dormência, metabolismo, macrófago, reativação.

PÁGINAS: 104
RESUMO:

A capacidade de se manter dormente ou em estado latente é uma adaptação observada em diversas células e organismos, na qual as células reduzem seu metabolismo, transcrição e tradução, para se manterem vivas em condições não ideais para seu crescimento. Assim, elas retomam o crescimento ativo quando o ambiente volta às condições favoráveis. Tal adaptação também é observada em leveduras de Cryptococcus neoformans, fungo causador da meningite criptocócica em pacientes imunocomprometidos. Nesse trabalho analisamos os mecanismos envolvidos na reativação de C. neoformans durante infecção de macrófagos e se as leveduras induzem mudanças no metabolismo celular dos fagócitos. Além disso, infectamos camundongos WT e KO imunossuprimidos e imunocompetentes para analisar se a presença de IFN-𝛾 ou NO evitava a reativação do C. neoformans também em um contexto in vivo, já que esse padrão foi demonstrado in vitro por nosso grupo de pesquisa anteriormente. Observamos que não é necessário que haja fagocitose do fungo para que este reative, sendo suficiente somente o contato com compostos extracelulares liberados pelos macrófagos, apesar de que as leveduras reativam em taxas mais expressivas quando há fagocitose. Observamos também que as vesículas extracelulares liberadas pelos macrófagos são importantes nesse processo de reativação fúngica. Além disso, observamos que o nosso modelo de C. neoformans dormente (DCn) só foi capaz de reativar em camundongos imunossuprimidos com dexametasona (C57Bl/6) deficientes na produção de IFN-𝛾 ou em camundongos imunodeficientes (Balb/c nude), em que o fungo manteve sua virulência e migrou para o SNC, onde retomou sua proliferação. Para análise do metabolismo celular, infectamos macrófagos com DCn, Stat e mortos por calor (HK) + 1% Stat por 24h. Em seguida, analisamos a massa mitocondrial, despolarização da membrana mitocondrial, produção de espécies reativas de oxigênio (ROS), captura de glicose e ácidos graxos por citometria de fluxo. Além disso, analisamos o perfil respiratório das células infectadas por oximetria e realizamos RT-qPCR para quantificação de genes importantes no metabolismo celular. Observamos que o DCn não altera significativamente a maioria dos aspectos analisados referente ao metabolismo mitocondrial, caracterizando uma estratégia de virulência para evitar a ativação do sistema imune, favorecendo a sua sobrevivência no fagolisossomo. Entretanto, todos os fungos induziram acidificação extracelular, indicando aumento na realização de glicólise pelos macrófagos, ao mesmo tempo que o Stat previne o aumento da captação de glicose induzida pelo tratamento com LPS e IFN-𝛾, possivelmente representando uma estratégia ativa de evitar a ativação pró-inflamatória. Curiosamente, o DCn induz uma maior captura de ácidos graxos por macrófagos pré-tratados com LPS e IFN-𝛾, apesar de reduzir a capacidade e dependência dos macrófagos utilizarem essa fonte de energia. Isso demonstrando a preferência do DCn pela utilização de lipídeos como fonte de energia e a capacidade de modular o metabolismo do macrófago hospedeiro a seu favor. Por fim, DCn modulou a expressão de genes relacionados ao metabolismo de glicose e ácidos graxos, apesar de em menor grau do que o Stat, mostrando que para uma expressão fenotípica, deve ser necessário um tempo de infecção mais prolongado.

MEMBROS DA BANCA:
Externo à Instituição - Milton Adriano Pelli de Oliveira - UFG
Presidente - 2223020 - ANAMELIA LORENZETTI BOCCA
Interna - 1207115 - ILDINETE SILVA PEREIRA
Externa ao Programa - 3088161 - JULIANA LOTT DE CARVALHO
Externo à Instituição - PEDRO MANOEL MENDES DE MORAES VIEIRA - UNICAMP