Banca de DEFESA: Ana Laura Alfonso Pérez

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : Ana Laura Alfonso Pérez
DATA : 09/03/2023
HORA: 09:30
LOCAL: Auditório 3
TÍTULO:

Desenvolvimento de sistemas de regulação da expressão gênica em leveduras baseados em optogenética e no uso de serina integrases

PALAVRAS-CHAVES:

leveduras, biologia sintética, regulação, optogenética, integrases

PÁGINAS: 161
RESUMO:

A levedura Komagataella phaffii (Pichia pastoris) tem sido utilizada como uma plataforma de produção de proteínas heterólogas há mais de 20 anos por apresentar níveis elevados de expressão gênica pelo uso do promotor do gene AOX1 (PAOX1) induzido por metanol, dentre outras vantagens. Entretanto, o metanol, indutor químico, é tóxico e inflamável. Nos últimos anos, a optogenética tornou-se uma ferramenta muito utilizada para a regulação de processos biológicos, como: expressão gênica, localização de proteínas, transdução de sinais e interações proteína-proteína. Baseia-se na utilização da luz, um indutor físico, para o desenvolvimento de sistemas reguláveis. A aplicação de um circuito optogenético em K. phaffii para a regulação da expressão gênica permite utilizar um sistema induzido que não afeta o metabolismo da levedura e nem sofre interferência do metabolismo celular. No presente projeto, buscamos pela primeira vez o desenvolvimento de um circuito optogenético em leveduras. Esse sistema foi baseado na interação responsiva à luz de proteínas de fusão que se ligam ao promotor PAOX1. O sistema optogenético foi construído com sucesso requerendo, todavia, ajustes metodológicos para sua implementação. Outro sistema de regulação estudado neste trabalho foi baseado no uso de integrases, uma classe de proteínas virais que mediam a integração e a excisão dos fagos no genoma. Recentemente, foram caracterizadas 11 integrases ortogonais e não há relatos de sua utilização na construção de circuitos na levedura Saccharomyces cerevisiae até o momento. Esta levedura é reconhecida como modelo para o estudo da biologia dos organismos eucariotos, sendo um dos microrganismos mais estudados e caracterizados. Foi avaliada a integrase 13, junto com a integrase 4 sob o controle do promotor responsivo a galactose. Estas integrases apresentaram a capacidade de ativar o dispositivo genético abrindo caminho para sua utilização como novas ferramentas moleculares para o desenvolvimento e construção de circuitos sintéticos. Por último, foi combinado o sistema de regulação com as integrases com o sistema optogenético com o objetivo de ter um sistema duplamente regulado. O sistema final obtido apresentou-se funcional necessitando ainda ajustes nas condições de exposição à luz vermelha/escuridão.

MEMBROS DA BANCA:
Externa à Instituição - Milca Rachel da Costa Ribeiro Lins - UFABC
Presidente - 1193623 - FERNANDO ARARIPE GONCALVES TORRES
Interna - 1207115 - ILDINETE SILVA PEREIRA
Externo à Instituição - JOÃO RICARDO MOREIRA DE ALMEIDA - EMBRAPA
Interno - 2122537 - MARCELO DE MACEDO BRIGIDO