Banca de DEFESA: Luisa Dan Favilla

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : Luisa Dan Favilla
DATA : 14/07/2023
HORA: 09:00
LOCAL: Videoconferência
TÍTULO:

Expandindo o estudo genético de Fonsecaea pedrosoi: O uso de marcadores e transformação biobalística para inativação do gene de triptofano sintase (trpB)

PALAVRAS-CHAVES:

recombinação gênica homóloga; double-joint PCR; biolística; mutante; trpB; Biossíntese de triptofano; Fonsecaea; cromoblastomicose

PÁGINAS: 61
RESUMO:

A cromoblastomicose (CBM) é uma doença causada por vários fungos demáceos de diferentes gêneros, sendo o Fonsecaea o isolado clínico mais comum. Diversos métodos de transformação genética foram descritos recentemente; no entanto, ferramentas moleculares para o estudo funcional de genes têm sido pouco relatadas para esses fungos. Neste trabalho, demonstramos que a deleção do gene e a geração do mutante nulo por recombinação homóloga são possíveis para Fonsecaea pedrosoi pelo uso de duas abordagens: uso de PCR de dupla articulação para construção de cassete, seguido pela entrega do marcador dividido por biolística transformação. Por meio de análises in silico, identificamos que F. pedrosoi apresenta o aparato enzimático completo necessário para a biossíntese do triptofano (trp). O gene que codifica uma triptofano sintase trpB - que converte corismato em trp - foi interrompido. O mutante auxotrófico ΔtrpB pode crescer com suprimento externo de trp, mas a germinação, a viabilidade dos conídios e o crescimento radial são defeituosos em comparação com as cepas selvagens e reconstituídas. O uso de 5-FAA para seleção de trpfenótipos e para contra-seleção de cepas portadoras do gene trp também foi demonstrado. As ferramentas moleculares para o estudo funcional dos genes, aliadas às informações genéticas dos bancos de dados genômicos, aumentam significativamente nosso entendimento da biologia e da patogenicidade dos agentes causadores da CBM.

MEMBROS DA BANCA:
Externa à Instituição - RENATA CASTIGLIONI PASCON - UNIFESP
Presidente - 2223020 - ANAMELIA LORENZETTI BOCCA
Externa ao Programa - 1335413 - FABIANA BRANDAO ALVES SILVA - nullExterna ao Programa - 1583080 - MARCIA CRISTINA GONCALVES MACIEL - null