Banca de DEFESA: José Herlânio de Lima

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : José Herlânio de Lima
DATA : 25/11/2022
HORA: 09:00
LOCAL: Videoconferência
TÍTULO:

Desenvolvimento de protocolos para o cultivo in vitro de espécies de Cyrtopodium nativas do Cerrado com potencial ornamental

PALAVRAS-CHAVES:

aclimatização, alongamento, Arduino, Biorreator de Imersão Temporária, Cyrtopodium, germinação assimbiótica.

PÁGINAS: 152
RESUMO:

As Orchidaceae são reconhecidas por suas flores de singular beleza. Em razão disso, são amplamente usadas como plantas ornamentais, seja como flores de corte ou plantas de vasos. O processo de produção de mudas se inicia com a germinação assimbiótica de suas sementes, seguido de uma fase de multibrotação e do alongamento das plantas cultivadas in vitro, e posterior aclimatização. Cada uma dessas etapas requer o uso de meio de cultivo e reguladores de crescimento adequados a cada espécie. Assim, nosso trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de protocolos para todas as fases do cultivo in vitro de duas espécies de Cyrtopodium nativas do Cerrado com potencial ornamental: C. parviflorum e C. withneri. Inicialmente foi medida a viabilidade das sementes por meio do teste do tetrazólio (TTC) em duas condições de pré-condicionamento por 24 h, embebição em água destilada ou em solução de sacarose a 10 %, e dois tipos de coloração com TTC a 1 %, diluído em água ou em tampão de fosfatos, e como controle foi feita a coloração direta em TTC a 1 % sem embebição. Após essa etapa foi realizada a germinação assimbiótica das sementes, onde foram testados três meios de cultivo Knudson C (KC) e Murashige & Skoog (MS), na concentração normal e com metade dos sais (½ MS), com e sem adição de carvão ativado (CA). Protocormos obtidos a partir da germinação assimbiótica foram cultivados em meio de cultivo sem adição de CA, em 10 combinações de ácido naftaleno acético (ANA) e 6-benzilaminopurina (BAP) a fim de verificar a melhor concentração para indução de multibrotação. Brotos oriundos da fase de multibrotação com 2-2,5 cm de altura foram alongados em dois sistemas: i. meio gelificado com e sem CA; ii. Biorreator de Imersão Temporária (BIT) com imersão por 3 minutos a cada 2, 4 ou 8 h, sem reguladores de crescimento, exceto para 8 h. Plantas então obtidas na fase de alongamento foram transferidas para casa de vegetação e cultivadas em substrato de vermiculita por 100 dias para que fossem aclimatizadas. Foram extraídas amostras de folhas de plantas ao final das fases de alongamento e aclimatização para quantificação dos teores de clorofilas e carotenoides. Amostras de folhas dessas fases também foram fixadas em FAA 50, e posteriormente foi realizada a dissociação das epidermes para contagem dos estômatos e determinação da densidade estomática. O teste de viabilidade por meio do TTC apresentou diferenças entre as espécies e entre os tratamentos utilizados, em especial quanto a embebição. O tratamento mais uniforme foi aquele com embeb ição em solução de sacarose a 10 % e coloração em TTC a 1 % diluído em água. A germinação ocorreu com elevado percentual nos três meios analisados, com efeito positivo da adição de CA. Entretanto, a germinação em meio KC não se mostrou viável, uma vez que ocorreu a morte de praticamente todos os protocormos desenvolvidos. Cyrtopodium parviflorum mostrou preferência para a germinação em MS, enquanto que para C. withneri a preferência se deu em ½ MS, ambos os meios adicionados de CA. A fase de multibrotação apresentou elevada sobrevivência das duas espécies em concentrações mais baixas de BAP, com redução expressiva em 2 e 4 mg/L (T7-T10). A produção de brotos também foi afetada pelo aumento na concentração de BAP, principalmente em C. parviflorum, que teve desenvolvimento de raízes inibido em qualquer concentração empregada (0,5-4,0 mg/L). Os demais parâmetros avaliados também indicaram o efeito deletério da citocinina usada. O emprego de ANA também não mostrou ser vantajoso, já que o cultivo sem adição de reg uladores de crescimento apresentou, de forma geral, os melhores resultados. A fase de alongamento apresentou diferenças contrastantes entre os dois sistemas. No sistema de BIT a mortalidade dos explantes foi quase que integral, enquanto que em meio gelificado houve sobrevivência superior a 90 %. Em meio gelificado os explantes se desenvolveram com sucesso, apresentando altura maior do que é descrito pela literatura. A aclimatização foi realizada apenas com plantas alongadas em meio gelificado com e sem CA. Cyrtopodium withneri apresentou 100 % de sobrevivência e C. parviflorum 94 %. As plantas desenvolveram completamente seus pseudobulbos, e algumas novas brotações. O substrato empregado, vermiculita, se mostrou adequado para esta etapa. Ao final dos 100 dias de aclimatização, houve diferença no tamanho das plantas, tendo C. withneri atingido o dobro da altura das plantas de C. parviflorum. Essa diferença de altura pode ser apenas a manifestação das características genéticas de cada espécie. Com isso, a aclimatização de C. parviflorum e C. withneri pode ser conduzida em casa de vegetação com 50 % de luminosidade e irrigação diária, e emprego de vermiculita como substrato. A quantificação das clorofilas e carotenoides mostrou aumento significativos desses pigmentos ao passar da fase de alongamento para o fim da aclimatização. Os teores desses pigmentos variaram durante as fases, sendo maiores para C. parviflorum ao final da aclimatização, e para C. withneri ao fim do alongamento. A densidade estomática praticamente não apresentou diferença entre as espécies e tratamentos, bem como quando comparada com plantas cultivadas em condição de campo. De forma geral, a densidade estomática das duas espécies foi elevada, sendo uma característica delas, pois na literatura há espécies com elevada densidade e outras com baixa densidade estomática. Ao final do trabalho pôde ser verificado que a produção in vitro de mudas de C. parviflorum e C. withneri pode ser realizada com sucesso com o emprego dos protocolos aqui avaliados, sendo recomendado a germinação, a multibrotação e alongamento em MS para C. parviflorum e em ½ MS para C. withneri, e aclimatização em vermiculita. O uso de reguladores de crescimento e o alongamento em BIT não são recomendados, em razão da baixa resposta das espécies a essas substâncias e ao sistema de alongamento.

MEMBROS DA BANCA:
Externo à Instituição - JOSE CARLOS SORGATO - UFGD
Externa à Instituição - LUCIA HELENA SOARES E SILVA
Externo ao Programa - 1192762 - LUIZ ALFREDO RODRIGUES PEREIRA
Externo à Instituição - NELSON BARBOSA MACHADO-NETO
Externo ao Programa - 2081739 - SERGIO ARAUJO FIGUEIREDO
Interno - 1986215 - THOMAS CHRISTOPHER RHYS WILLIAMS