Desenvolvimento de vacinas baseadas em VLP (Virus-like Particles) contra a doença de Chagas
Trypanosoma cruzi; oligopeptidase B; thimet oligopeptidase; hepatite B.
A doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, permanece um grave problema de saúde pública, com limitações terapêuticas significativas, especialmente na fase crônica. O objetivo desta pesquisa foi desenvolver uma plataforma vacinal baseada em partículas semelhantes a vírus (do inglês, Virus-Like Particles; VLPs) contendo epítopos da thimet oligopeptidase e da oligopeptidase B, enzimas importantes para a infecção e sobrevivência do parasito. Através de análises imunoinformáticas, foram selecionadas regiões imunogênicas e conservadas de cada proteína, que foram fusionadas ao antígeno de superfície do vírus da hepatite B (HBsAg). As construções quiméricas (TOPTc-HBsAg e OPBTc-HBsAg) foram clonadas com sucesso em vetores para expressão em levedura (Komagataella phaffii) e em células mamíferas (HEK293). A expressão proteica foi confirmada por Western Blot e Dot Blot. As VLPs produzidas em leveduras foram isoladas por ultracentrifugação em gradiente de CsCl e caracterizadas quanto ao tamanho e morfologia por espalhamento dinâmico de luz (DLS) e microscopia eletrônica de transmissão (MET). As análises de DLS revelaram tamanhos médios de 20,4 ± 8,9 nm para TOPTc-HBsAg e 27,4 ± 14,4 nm para OPBTc-HBsAg, compatíveis com a faixa esperada para VLPs. A expressão em células mamíferas validou a funcionalidade dos plasmídeos, mas revelou citotoxicidade dependente da dose, indicando a necessidade de otimização. Os resultados demonstram a viabilidade da produção das VLPs quiméricas e estabelecem as bases para futuros estudos de imunogenicidade e eficácia protetora em modelos animais, representando um avanço promissor no desenvolvimento de uma vacina contra a doença de Chagas.