Banca de DEFESA: Paula Marian Vieira Goulart

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : Paula Marian Vieira Goulart
DATA : 08/02/2024
HORA: 09:00
LOCAL: auditorio 1 do Instituto de Biologi
TÍTULO:

23106.144991/2023-53 (Administração Geral: Pedidos, Oferecimentos e Informações Diversas)

PALAVRAS-CHAVES:

Trypanosoma:ds are a group of parasi:c protozoa belonging to the Kinetoplas:da class, including species from the genera Trypanosoma and Leishmania. These microorganisms possess unique organelles that play fundamental roles in their nutri:on and survival. An example is the glycosome, an organelle related to the peroxisome, noted for the diversity of its enzyma:c repertoire, involved in processes such as the pentose phosphate pathway, gluconeogenesis, purine salvage, fajy acid β-oxida:on, and the biosynthesis of ether lipids, isoprenoids, sterols, and pyrimidines. Due to the presence of enzymes in pathways considered essen:al, many glycosomal enzymes have been promising targets for the development of new drugs. However, un:l now, the analysis of the proteome of this organelle has been approached through conven:onal enrichment methods, resul:ng in limited coverage of iden:fied proteins. To overcome this limita:on, proximity labeling methods have been widely applied for proteomic mapping of different subcellular compartments. Thus, the aim of this study was to develop a proximity labeling strategy based on APEX2 to analyze the protein composi:on of glycosomes and the nucleus of Leishmania infantum and Trypanosoma cruzi. Ini:ally, we cloned the APEX2 sequence fused to the glycosomal targe:ng pep:de (PTS1) and the nuclear localiza:on signal (NLS) into the pLEXSY vector (Leishmania) and pTREX vector (T. cruzi), and as a control, we cloned the NeonGreen sequence fused to the same pep:des, totaling 6 constructs. Amer plasmid transfec:on and selec:on of parasites resistant to the selec:on marker, different clones were evaluated for their expression and ac:vity. The results indicated that APEX2 proteins were abundantly expressed in the protein extracts of both parasites transfected with the casseje. However, in rela:on to mNeonGreen proteins, reduced expression was observed in the examined protein extracts. Addi:onally, APEX2-PTS1 and APEX2-NLS proteins specifically bio:nylated proteins in glycosomes and the nucleus, respec:vely, in L. infantum. These results reveal the poten:al feasibility of applying APEX2 in the biochemical context of L. infantum. As a perspec:ve, we aim to validate the technique in T. cruzi and perform a compara:ve proteomic analysis between the two organisms. We believe that this approach will allow us to uncover metabolic adapta:on mechanisms employed by this group of parasites, as well as iden:fy poten:al pharmacological targets for the treatment of diseases associated with trypanosoma:ds. Palavras-ch

PÁGINAS: 80
RESUMO:

Os tripanossomaMdeos são um grupo de protozoários parasitas pertencentes à classe Kinetoplas:da, incluindo espécies dos gêneros Trypanosoma e Leishmania. Esses microrganismos possuem organelas exclusivas que desempenham papéis fundamentais em sua nutrição e sobrevivência. Um exemplo é o glicossomo, uma organela relacionada ao peroxissomo, destacado pela diversidade de seu repertório enzimá:co, envolvido em processos como via das pentoses-fosfato, gliconeogênese, recuperação de purina, β-oxidação de ácidos graxos e biossíntese de éter-lipídios, isoprenóides, esteróis e pirimidinas. Devido à presença de enzimas em vias consideradas essenciais, muitas enzimas glicossomais têm sido alvos promissores para o desenvolvimento de novos fármacos. No entanto, até o momento, a análise do proteoma dessa organela foi abordada por meio de métodos convencionais de enriquecimento, que resultam em uma cobertura limitada das proteínas iden:ficadas. Para superar essa limitação, os métodos de marcação por proximidade têm sido amplamente aplicados para o mapeamento proteômico de diferentes compar:mentos subcelulares. Desta forma, o obje:vo desse estudo foi elaborar uma estratégia de marcação de proximidade baseada em APEX2 para analisar a composição proteica dos glicossomos e do núcleo de Leishmania infantum e Trypanosoma cruzi. Inicialmente, clonamos nos vetores pLEXSY (Leishmania) e pTREX (T. cruzi) a sequência da APEX2 fusionada ao pepMdeo de endereçamento glicossômico (PTS1), bem como com o sinal de localização nuclear (NLS) e, como controle, foi clonada a sequência de NeonGreen fusionada aos mesmos pepMdeos, totalizando 6 construções. Após transfecção dos plasmídeos e seleção dos parasitos resistentes à marca de seleção, os diferentes clones foram avaliados quanto à sua expressão e a:vidade. Os resultados indicaram que as proteínas APEX2 estão abundantemente expressas nos extratos proteicos de ambos os parasitas transfectados com o cassete. Contudo, em relação às proteínas mNeonGreen, observou-se uma expressão reduzida nos extratos proteicos examinados. Adicionalmente, as proteínas APEX2-PTS1 e APEX2- NLS promoveram a bio:nilação específica de proteínas nos glicossomos e no núcleo, respec:vamente, em L. infantum. Esses resultados revelam a possível viabilidade da aplicação da APEX2 no contexto bioquímico de L. infantum. Como perspec:va, visamos validar a técnica em T. cruzi e realizar uma análise proteômica compara:va entre os dois organismos. Acreditamos que essa abordagem nos permi:rá revelar mecanismos de adaptação metabólica empregados por esse grupo de parasitas, além de iden:ficar possíveis alvos farmacológicos para o tratamentO das doenças associadas a tripanossomaMdeos.

MEMBROS DA BANCA:
Externo ao Programa - 404930 - CARLOS ANDRE ORNELAS RICART - nullExterna à Instituição - Clênia dos Santos Azevedo - MS
Presidente - 2594909 - SEBASTIEN OLIVIER CHARNEAU