Banca de DEFESA: Gildemar Jose Bezerra Crispim

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : Gildemar Jose Bezerra Crispim
DATA : 27/01/2023
HORA: 14:00
LOCAL: Plataforma Teams
TÍTULO:

Desenvolvimento de teste sorológico (ELISA) para COVID-19 com antígeno viral (proteína nucleocapsídeo, N) SARS-CoV-2

PALAVRAS-CHAVES:

Sars-Cov-2, nucleocapsídeo N, Baculovírus recombinante, ELISA

PÁGINAS: 55
RESUMO:

A COVID-19 (do inglês coronavírus disease 2019), é uma doença cuja forma severa é caracterizada pela Síndrome Respiratória Aguda Grave, é causada pelo novo betacoronavírus SARS-CoV-2 (do inglês Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2. Desde o relato do primeiro caso na cidade de Wuhan, província de Hubei, China, em dezembro de 2019, o SARS- CoV-2 tem se espalhado rapidamente no mundo. No dia 30 de janeiro de 2020, a Organização Mundial de Saúde (OMS) classificou a doença como uma emergência de saúde internacional e no dia 11 de março declarou haver uma pandemia, com aproximadamente 118.000 casos em 114 países e territórios (OMS,2020). A atual pandemia da COVID- 19, vem exigindo o desenvolvimento de vários produtos e serviços biotecnológicos para detecção, tratamento e prevenção de infecções e doenças causadas por esse vírus. Além das ferramentas moleculares para detecção desse vírus, como a reação em cadeia da polimerase quantitativa com transcriptase reversa (RT-qPCR), técnicas sorológicas foram desenvolvidos e têm sido bastante empregadas para avaliar a soroconversão de pacientes infectados e imunizados. Neste trabalho, utilizamos a expressão da proteína nucleocapsídeo (N) de SARS-CoV-2 em células de insetos, seguida de sua purificação por cromatografia de afinidade. O gene N foi clonado no genoma do Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) via transposição e o baculovírus recombinante resultante foi usado para infecção de células de lepidópteros (Sf9) adaptadas à suspensão de alta densidade. Usando tampão Tris-HCl pH 8,0 como fase móvel e eluindo proteínas ligadas com imidazol 175 mM como parte de um gradiente de três etapas, uma média de 1 mg de proteína N pode ser purificada de cada 50 mg de proteína total do extrato de proteínas solúveis de células de inseto infectadas. O antígeno foi testado em amostras obtidas de pacientes confirmados para COVID-19 por RT-qPCR do Hospital Regional de Santa Maria –DF e aplicado em um modelo de ELISA indireto – in house. Os resultados apresentaram índices satisfatórios para a utilização do antígeno na detecção de IgG de pacientes infectados em diferentes períodos da doença. O ELISA indireto in-house pode ser usado como ferramenta para o detecção de IgG de forma quantitativa. Nesse trabalho as análises auferidas mostraram que a proteína N, tem potencial imunogênico, e que o protótipo ELISA – inhouse, pode ser uma ferramenta utilizada no diagnóstico da COVID-19, tendo em vista os dados alcançados na análise estatística, onde apresentaram uma sensibilidade de 94,4%, especificidade de 92,1% e acurácia de 92,5% nas amostras com desconto das reações de fundo (reações inespecíficas), utilizando-se da curva ROC e com intervalo de confiança de 95% (IC95%) nos paciente que apresentaram sintomas inferiores a sete dias da infecção. As amostras com intervalo >7 a 14 dias, alcançaram a sensibilidade de 100% e a especificidade de 94,4% utilizando-se da curva ROC. Outro fator observado, indica que a análises sem o desconto das reações de fundo (reações inespecíficas) diminuem a sensibilidade de especificidade em em ambas as análises (NBS e NBF).

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 3141443 - BERGMANN MORAIS RIBEIRO
Externo à Instituição - FABRICIO SOUZA CAMPOS - UFRGS
Interna - 6404463 - MARIA IMACULADA MUNIZ BARBOZA JUNQUEIRA
Externo ao Programa - 1623558 - TATSUYA NAGATA