Banca de DEFESA: Farah Camila Murtadha

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : Farah Camila Murtadha
DATA : 30/06/2023
HORA: 09:30
LOCAL: on line
TÍTULO:

Utilização da APEX2 para marcação de proteínas mitocondriais de Plasmodium falciparum associada a predições in silico e data mining

PALAVRAS-CHAVES:

malária, Plasmodium falciparum, mitocôndria, APEX2, biotinilação, predições in silico, data mining.

PÁGINAS: 75
RESUMO:

A malária é uma doença, na qual tem como agentes etiológicos os protozoários do gênero Plasmodium, sendo que a espécie responsável pelos casos clínicos mais graves é o P. falciparum. Em 2020, foram registrados 241 milhões de casos de malária, sendo que foram registrados, apenas na Região Africana, onde predomina a espécie P. falciparum, cerca de 95% total dos casos, dessa forma, estudar o parasita se torna necessário, principalmente pelos registros crescentes de resistência aos antimaláricos atuais. A fim de compreender melhor uma das organelas essenciais para a sobrevivência do parasita, o presente trabalho objetivou utilizar a APEX2 para marcar através da biotinilação as proteínas mitocondriais de P. falciparum. Esta metodologia, permite que através do uso do substrato (biotina-fenol) e agente oxidante (peróxido de hidrogênio), a biotinilação de proteínas de compartimentos celulares de interesse ocorra, permitindo uma análise detalhada e fidedigna do conteúdo proteômico, através do enriquecimento das proteínas biotiniladas. Após a obtenção de parasitas transfectados com o plasmídeo de expressão epissomal contendo a sequencia codificadora para APEX2 fusionada a um putativo sinal de endereçamento mitocondrial, por Western-blot e estreptavidina-blot, foi observado que tanto a expressão da HA-APEX2 e marcação por biotinilação ocorreram. No entanto, a citolocalisação da APEX2 por imunofluorescência, ocorreu de forma difusa em todo o corpo celular do parasita. Então, HA-APEX2 não foi endereçada especificamente na mitocôndria de P. falciparum. Além da mitocôndria, o P. falciparum, possui outra organela plastidial com características plant-like, denominada apicoplasto. Por alguma razão ainda desconhecida, ambas as organelas apresentam uma inter-relação bioquímica na biossíntese do grupo heme. Por esse motivo, as estratégias de predição in silico e data mining (mineração de dados) das proteínas mitocondriais e de apicoplasto, foram empregadas para compor os subproteomas preditos de ambas organelas. No total, foram preditas 708 proteínas mitocondriais, e, 781 proteínas pertencentes do apicoplasto de P. falciparum. Após uma comparação entre os datasets, observou-se uma sobreposição de 108 proteínas. Apesar de ser uma mera análise de bioinformática, este fato reforça as evidências amplamente conhecidas, acerca da biologia da mitocôndria e do apicoplasto de P. falciparum. Devido a marcação inespecífica da mitocôndria pela HA-APEX2, uma nova sequência está em fase de clonagem para posterior transfecção. O intuito principal da realização das predições de ambas as organelas, está fundamentada nas características já expostas de ambas organelas. Desse modo, um panorama detalhado acerca das características bioquímicas de ambas organelas já foi estabelecido, para auxiliar nas futuras análises proteômicas.

MEMBROS DA BANCA:
Externa à Instituição - Clênia dos Santos Azevedo - MS
Externa ao Programa - 1930428 - FLAVIA DA SILVA NADER MOTTA
Externo ao Programa - 027.367.691-12 - LUCAS SILVA DE OLIVEIRA - UnB
Presidente - 2594909 - SEBASTIEN OLIVIER CHARNEAU