Banca de DEFESA: Paula Marian Vieira Goulart

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : Paula Marian Vieira Goulart
DATA : 08/02/2024
HORA: 09:00
LOCAL: auditorio 4 do Instituto de Biologia
TÍTULO:

Implementação de um sistema de marcação proteômica organelar por proximidade baseado em APEX2 para glicossomos e núcleos de tripanossomatídeos

PALAVRAS-CHAVES:

L. infantum, T. cruzi, APEX2, glicossomos, núcleo, proteômica de organelas

PÁGINAS: 80
RESUMO:

Os tripanossomaMdeos são um grupo de protozoários parasitas pertencentes à classe Kinetoplas:da, incluindo espécies dos gêneros Trypanosoma e Leishmania. Esses microrganismos possuem organelas exclusivas que desempenham papéis fundamentais em sua nutrição e sobrevivência. Um exemplo é o glicossomo, uma organela relacionada ao peroxissomo, destacado pela diversidade de seu repertório enzimá:co, envolvido em processos como via das pentoses-fosfato, gliconeogênese, recuperação de purina, β-oxidação de ácidos graxos e biossíntese de éter-lipídios, isoprenóides, esteróis e pirimidinas. Devido à presença de enzimas em vias consideradas essenciais, muitas enzimas glicossomais têm sido alvos promissores para o desenvolvimento de novos fármacos. No entanto, até o momento, a análise do proteoma dessa organela foi abordada por meio de métodos convencionais de enriquecimento, que resultam em uma cobertura limitada das proteínas iden:ficadas. Para superar essa limitação, os métodos de marcação por proximidade têm sido amplamente aplicados para o mapeamento proteômico de diferentes compar:mentos subcelulares. Desta forma, o obje:vo desse estudo foi elaborar uma estratégia de marcação de proximidade baseada em APEX2 para analisar a composição proteica dos glicossomos e do núcleo de Leishmania infantum e Trypanosoma cruzi. Inicialmente, clonamos nos vetores pLEXSY (Leishmania) e pTREX (T. cruzi) a sequência da APEX2 fusionada ao pepMdeo de endereçamento glicossômico (PTS1), bem como com o sinal de localização nuclear (NLS) e, como controle, foi clonada a sequência de NeonGreen fusionada aos mesmos pepMdeos, totalizando 6 construções. Após transfecção dos plasmídeos e seleção dos parasitos resistentes à marca de seleção, os diferentes clones foram avaliados quanto à sua expressão e a:vidade. Os resultados indicaram que as proteínas APEX2 estão abundantemente expressas nos extratos proteicos de ambos os parasitas transfectados com o cassete. Contudo, em relação às proteínas mNeonGreen, observou-se uma expressão reduzida nos extratos proteicos examinados. Adicionalmente, as proteínas APEX2-PTS1 e APEX2- NLS promoveram a bio:nilação específica de proteínas nos glicossomos e no núcleo, respec:vamente, em L. infantum. Esses resultados revelam a possível viabilidade da aplicação da APEX2 no contexto bioquímico de L. infantum. Como perspec:va, visamos validar a técnica em T. cruzi e realizar uma análise proteômica compara:va entre os dois organismos. Acreditamos que essa abordagem nos permi:rá revelar mecanismos de adaptação metabólica empregados por esse grupo de parasitas, além de iden:ficar possíveis alvos farmacológicos para o tratamentO das doenças associadas a tripanossomaMdeos.

MEMBROS DA BANCA:
Interno - 404930 - CARLOS ANDRE ORNELAS RICART
Externa à Instituição - Clênia dos Santos Azevedo - MS
Externo ao Programa - ***.367.691-** - LUCAS SILVA DE OLIVEIRA - UnB
Presidente - 2594909 - SEBASTIEN OLIVIER CHARNEAU