"PRODUÇÃO EM LARGA ESCALA DA LACASE 1 RECOMBINANTE DE Cryptococcus neoformans NO SISTEMA DE EXPRESSÃO HETERÓLOGA Pichia Pastoris."
Cryptococcus neoformans , proteína heteróloga, produção em larga escala, Lacase 1, pichia pastoris
A meningoencefalite causada pelo fungo Cryptococcus neoformans em pacientes imunocomprometidos, principalmente em pacientes com HIV, tem causado aproximadamente 122 mil mortes por ano. Os mecanismos de infecção e sua virulência são objeto de intensa investigação. A melanização do fungo é um dos fatores que aumenta sua virulência, e é catalisada por uma enzima chamada lacase 1 (Lac1). Porém, além da atividade descrita, constatou-se que essa enzima pode ser um dos fatores que permite a sobrevivência do fungo no próprio líquido cefalorraquidiano (LCR), contribuindo para sua permanência no encéfalo. A levedura, Pichia pastoris, é um bom modelo para produção de proteínas. A cepa X-33 dessa levedura foi transformada por um plasmídeo contendo a sequência codante de Lac1, com o objetivo de produção de lacase recombinante. A expressão da enzima nos transformantes foi testada por ABTS, otimizada por testes de produção temporal, concentração de cobre, pH com vistas à produção e purificação futuras em larga escala para produção de anticorpos monoclonais.