Banca de DEFESA: Giulia Causin Vieira

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : Giulia Causin Vieira
DATA : 19/09/2023
HORA: 10:00
LOCAL: Microsoft Teams:
TÍTULO:

Caracterização in silico e avaliação da atividade anti-hemostática do antígeno-5 da saliva de Rhodnius neglectus, vetor da doença de Chagas

PALAVRAS-CHAVES:

Inseto; Hematofagia; Hemostasia; Bioinformática estrutural; Proteína recombinante

PÁGINAS: 99
RESUMO:

Os triatomíneos são insetos hematófagos transmissores do protozoário Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas. Sua saliva é rica em compostos que neutralizam as respostas hemostáticas e imunológicas do hospedeiro. O antígeno 5 (Ag5), membro da superfamília CAP, composta por proteínas ricas em resíduos de cisteína (CRISP - cysteine rich secretory proteins), pelo Antígeno 5 e por proteínas relacionadas à patogenicidade em plantas (Pathogenesis-related – PR1), foi relatado na saliva de artrópodes como responsável por causar fortes respostas alérgicas. A atividade do Ag5 já encontrada em triatomíneos está correlacionada à prevenção da agregação plaquetária induzida por colágeno. Este estudo teve como objetivo utilizar abordagens de bioinformática para caracterizar o antígeno 5 salivar de Rhodnius neglectus (RnAg5), produzir a proteína RnAG5 recombinante e avaliar seu potencial inibitório da agregação plaquetária e da coagulação sanguínea. Análises in silico foram realizadas para prever o suposto peptídeo sinal, localização celular e modificações póstraducionais. A estrutura 3D do RnAg5 foi obtida por inteligência artificial, através do servidor Alphafold, e os aminoácidos que compõem epítopos de células B foram preditos com os servidores ElliPro, BepiPred e SeRenDIP. Com a finalidade de identificar ligantes promissores, foram realizados cálculos de docking molecular, utilizando o servidor web DockThor, contra moléculas pequenas para identificar ligantes promissores. A sequência Ag5 foi clonada no vetor pET100/D-TOPO, expressa em Escherichia coli Rosetta(DE3)pLysS com isopropil B-Dtiogalactopiranosídeo 1 mM a 37ºC, com massa molecular de aproximadamente 31 kDa. Foi possível obter o RnAg5 em fração solúvel e em corpos de inclusão, sendo essa proteína recombinante purificada por cromatografia de afinidade de íons metálicos imobilizados. O RnAg5 possui um peptídeo sinal no N-terminal e pode ser secretado pela via clássica. Ele contém 25 locais putativos de fosforilação e 10 resíduos potenciais de glicosilação. A capacidade do Ag5 de interagir com lipídios está associada a uma região conservada na superfamília CAP, o sítio de ligação possui duas hélices alfa paralelas, que formam uma longa cavidade hidrofóbica. O potencial sítio hidrofóbico de ligação foi previsto no modelo 3D. Os resultados de docking mostraram que o fator ativador de plaquetas, o leucotrieno D4 e a prostaglandina podem se ligar ao RnAg5 com pontuação de docking de -8,72; -8,16 e -7,80 Kcal•mol-1, respectivamente. Além disso, foram previstos 176 resíduos que formam epítopos lineares e 201 resíduos que formam epítopos conformacionais. Esses resultados foram de extrema relevância, uma vez que as proteínas Ag5 são alérgenos já caracterizados em outras espécies de artrópodes e podem se tornar um possível marcador de exposição a picadas de triatomíneos. A compreensão do papel do Ag5 salivar na interface triatomíneo-hospedeiropatógeno pode levar ao desenvolvimento de novas estratégias para controlar a transmissão da doença de Chagas.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 2088007 - CARLA NUNES DE ARAUJO
Externo ao Programa - ***.367.691-** - LUCAS SILVA DE OLIVEIRA - UnB
Externa à Instituição - MELINA MOTTIN - UFG
Interno - 2376346 - OTAVIO DE TOLEDO NOBREGA