Desenvolvimento de Sistema de Metilação in vivo para Transformação de Clostrídios de Interesse Industrial
Clostridium, engenharia metabólica, fermentação ABE, butanol, isopropanol.
A mudança climática e a volatilidade do preço do petróleo exigem uma resposta na forma de combustível renovável e recursos químicos. As bactérias solventegênicas Clostridium saccharobutylicum NCP 262 (DSM 13864) e C. acetobutylicum ATCC 824 (DSM 792) exibem alta produção de solvente e bioH2 de diversas matérias-primas, tornando esses dois candidatos ideais para otimização de rendimentos e produtividade por meio de modificação genética. A otimização da tensão entre bactérias fermentadoras ABE é complicada pela presença de sistemas de modificação de restrição (RM). Estudos anteriores desativaram os sistemas de RM para manipular e estudar a via metabólica, mas as cepas bacterianas destinadas à produção de solventes industriais devem manter os sistemas de RM intactos devido ao risco de infecção por bacteriófagos. A integração e a expressão heteróloga dos genes da metiltransferase de C. saccharobutylicum NCP 262 e C. acetobutylicum DSM 792 em uma bactéria hospedeira permitiria a metilação do DNA estável e rápida antes da transformação. Neste estudo, um sistema combinado de CRISPR/Cas9 e Lambda-Red será utilizado para criar bactérias para funcionar como plataformas de metilação. O próximo objetivo será a transformação e expressão do gene sadH em C. saccharobutylicum NCP 262 e C. acetobutylicum DSM 792 para conversão de acetona em isopropanol seguido de estudos de crescimento em vários estoques de crescimento. Possíveis objetivos futuros incluem a integração genômica do gene sadH no genoma NCP 262 e DSM 792 para expressão heteróloga sem pressão seletiva.