Banca de QUALIFICAÇÃO: Cecibel María León Félix

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : Cecibel María León Félix
DATA : 05/07/2023
HORA: 08:30
LOCAL: Auditório do IB
TÍTULO:

"Obtenção de matriz extracelular descelularizada de tecido ovariano bovino e sua caracterização."

PALAVRAS-CHAVES:

ovário, SDS, descelularização, matrisome, proteômica.

PÁGINAS: 120
RESUMO:

A matriz extracelular descelularizada (MEC) de vários tecidos (coração, pulmão, rim, útero e testículo) está permitindo a regeneração e a recuperação das células nativas e das funções do tecido. Uma alternativa para manter a fertilidade em mulheres diagnosticadas com câncer, que se tornariam inférteis devido à quimioterapia e/ou radioterapia, é o desenvolvimento de um ovário artificial transplantável. A MEC descelularizada do tecido ovariano foi obtida usando dodecil sulfato de sódio (SDS), geralmente em uma concentração de 1% por 24 h. No entanto, o SDS pode deixar resíduos no tecido, que podem ser tóxicos para as células semeadas. Portanto, o objetivo do presente estudo foi obter uma matriz extracelular descelularizada de tecido ovariano de vaca com SDS, mas com menor concentração e menor tempo de incubação. Além disso, identificar as moléculas e as funções da MEC nativa e descelularizada. Para isso, ovários de vaca procedentes de abatedouro foram transportados ao laboratório em solução salina a 37 °C. No laboratório, folículos antrais foram puncionados com uma agulha, e a cápsula e a região medular do ovário foram removidas. Fatias (10 mm x 5 mm x 1 mm) foram obtidas da região cortical do ovário, pesadas e distribuídas entre os grupos de tratamento. A solução estoque de SDS foi preparada com 1% de SDS (Sigma-Aldrich, Brasil) e NaOH 0,2M em água destilada e depois diluída até as concentrações desejadas. As concentrações de SDS utilizadas foram 1%, 0,5%, 0,1%, 0,05% e 0,01%, com ou sem desoxirribonuclease I (DNase I, 1 mg/mL, Roche Diagnostics GmbH, Alemanha) e tempos de incubação de 24 h, 12 h e 6 h. As fatias de ovário foram submersas individualmente em 10 mL de cada mistura, sob agitação constante (100 rpm), em temperatura ambiente e pelo período definido para cada tratamento. Em seguida, foram lavadas em 50 ml de água destilada por 6 horas, trocando a água destilada a cada 30 minutos. O tecido obtido de cada tratamento foi analisado por eletroforese para avaliar o tamanho dos fragmentos de DNA remanescentes nas fatias ovarianas, quantificação do DNA pelo Fluorômetro Qubit® 2.0 (Thermo Fisher Scientific) e histologia. A menor concentração de SDS que não mostrou DNA remanescente na análise de eletroforese foi de 0,1%, quando incubado por 24 h e 12 h, mas não por 6 h. Além disso, a análise histológica confirmou a descelularização e a coloração com tricrômico de Mallory mostrou a conservação das fibras de colágeno e elastina em todas as amostras após cada tratamento. A viabilidade celular mostrou que a MEC descelularizada por incubação em 0,1% de SDS por 12 h não era tóxico para as células ovarinas durante o cultivo in vitro por 24 e 72 h. Além disso, foram identificadas as moléculas e funções da MEC nativa e descelularizada por 0,1% de SDS por 12 h através de análise da proteômica e por análise de oncologia genética. Assim, foram identificação 155 proteínas na MEC nativa (87 proteínas centrais e 68 proteínas associadas a matrisome) e 145 proteínas na MEC descelularizada (84 proteínas centrais e 61 proteínas associada a matrisome). Também foram identificadas as funções biológicas e celulares das proteínas da MEC nativa e descelularizada. Desta forma, concluímos que o protocolo de 0,1% de SDS por 12 h de incubação descelulariza o tecido ovariano de vaca, gerando uma MEC descelularizada não tóxica para as células ovarianas e conserva as moléculas da MEC descelularizada o mais semelhante possível à MEC nativas.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 2374060 - CAROLINA MADEIRA LUCCI
Externa ao Programa - 3088161 - JULIANA LOTT DE CARVALHO
Interna - 395.928.980-49 - MARGOT ALVES NUNES DODE - EMBRAPA
Externo à Instituição - MAURÍCIO MACHAIM FRANCO - EMBRAPA