" Comparação de métodos de criopreservação em tecido ovariano de gatas domésticas: vitrificação versus congelamento lento ".
congelamento lento; vitrificação; crioprotetores; germoplasma animal.
O presente estudo testou duas técnicas de criopreservação (vitrificação e congelamento lento) com combinações diferentes de crioprotetores. Para realizar o estudo, foram utilizados os ovários de 10 gatas submetidas a ovariohisterectomia eletiva na clínica veterinária Casa do Gato, localizada em Brasília, DF. No total, foram coletados 20 ovários, cada um dos quais foi dividido em oito fragmentos de 3mm³. Dois fragmentos de cada ovário foram imediatamente fixados para o controle fresco, enquanto os outros seis foram divididos em três para serem vitrificados e três para serem criopreservados por congelamento lento. Para o processo de vitrificação, diferentes soluções de equilíbrio (SE) e de vitrificação (SV) foram testadas. Essas soluções incluíam 10% de dimetilsulfóxido (DMSO) associado a 10% de etilenoglicol (EG) e combinado com 0,1M de trealose no SE, e 20% de DMSO e 20% de EG com 0,1M de trealose no SV (V1). Outra solução consistiu em 10% de DMSO associado a 10% de EG e combinado com 0,1M de sacarose no SE, e 20% de DMSO e 20% de EG com 0,1M de sacarose no SV (V2). Uma terceira solução foi composta por 20% de DMSO combinado com 0,1M de trealose no SE e 40% de DMSO combinado com 0,1M de trealose no SV (V3). Para a congelamento lento, as soluções consistiram em 1M de DMSO, 1M de EG e 10% soro fetal bovino (SFB) combinados à 0,4% trealose (CL1), 1,5 M de DMSO e 10% SFB combinados com 0,4% sacarose (CL2) ou 0,4% trealose (CL3). Todas as amostras foram armazenadas em nitrogênio líquido durante pelo menos sete dias e os fragmentos foram descongelados ou desvitrificados e fixados após esse período. Foram realizadas análises histológicas para a contagem e classificação de folículos pré-antrais e testes imunohistoquímicos para avaliar se os folículos estavam proliferativos. O grupo V1, teve a maior taxa de preservação da reserva folicular primordial e de folículos em crescimento e mostrou ser a mais eficaz na sobrevivência folicular. Assim, é possível inferir que a vitrificação com uso de 10% DMSO, 10% EG e 0,1M trealose mostrou efeitos benéficos, mas estudos futuros são necessários para maior comprovação da eficácia dos protocolos apresentados.