Banca de DEFESA: Alessandro Zanard Lopes Ferreira

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : Alessandro Zanard Lopes Ferreira
DATA : 17/04/2023
HORA: 09:00
LOCAL: Plataforma Teams
TÍTULO:

Análise Funcional da Cinesina C de Trypanosoma Cruzi utilizando o sistema CRISPR/Cas9

PALAVRAS-CHAVES:

Doença de Chagas; Trypanosoma cruzi; CRISPR/Cas9; Cinesina.

PÁGINAS: 116
RESUMO:

A Doença de Chagas (DC) é uma patologia parasitária causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi. Considerada uma doença tropical negligenciada, a DC afeta milhões de pessoas nos 21 países da América Latina em que é endêmica e nos países recipientes de imigrantes dessa região. Devido à escassez de medicamentos disponíveis para seu tratamento, há um elevado interesse em conhecer os componentes homeostásicos do tripanossomatídeo Trypanosoma cruzi, de forma a buscar possíveis alvos farmacológicos. Neste sentido, considerando a já conhecida importância das cinesinas em diversas enfermidades devido ao seu papel na regulação da citocinese e manutenção da morfologia celular, buscamos neste trabalho caracterizar a proteína motora cinesina C (TcKIN-C) de T. cruzi e sua importância na homeostase celular. Inicialmente foi feito um levantamento in sílico das características da TcKIN-CC, cinesina órfã presente somente no T. cruzi, expressa pelos alelos TcCLB.504427.260 e TcCLB.508043.40. Adicionalmente, utilizando a premissa da metagenômica, foi utilizado a ferramenta biotecnológica CRISPR/Cas9 no objetivo de provocar uma interrupção na expressão TcKIN-C, resultando na expressão truncada desta proteína e possível perda da sua funcionalidade. Através da análise in sílico, foi observado uma diferença significativa na sequência dos dois alelos, de modo que foi realizado uma análise de ambos os alelos utilizando ferramentas de bioinformática, desde alinhamentos, predição de modificações pós-traducionais (MPTs), redes de interação até a estrutura 3D de ambos os alelos. Em seguida, foi realizado um nocaute utilizando a técnica supracitado, onde foi traçado duas estratégias: um nocaute inicial (denominado Estratégia I) sem seleção para observar os efeitos a nível populacional e um segundo nocaute (denominado Estratégia II), onde a população transgênica foi selecionada e os efeitos da deleção da TcKIN-C foram estudados mais detalhadamente. Até a data desta publicação, não há publicado nenhum outro trabalho que faça a caracterização funcional de uma cinesina em Trypanosoma cruzi. Em suma, como observado no Trypanosoma brucei, este trabalho corrobora com a noção de que as cinesinas têm importância central para a sobrevivência desses parasitos. Ademais, também foi possível alcançar o objetivo de selecionar populações transgênicas, possibilitando estudos posteriores.

MEMBROS DA BANCA:
Externa à Instituição - Clênia dos Santos Azevedo - MS
Presidente - 2492352 - IZABELA MARQUES DOURADO BASTOS CHARNEAU
Externa ao Programa - 720.924.081-00 - PAULA BEATRIZ DE MEDEIROS SANTIAGO - UnB
Externo ao Programa - 1876284 - VICENTE DE PAULO MARTINS