Banca de DEFESA: MAQUIR ALMIRANTE CARDOSO

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : MAQUIR ALMIRANTE CARDOSO
DATA : 31/07/2026
HORA: 09:00
LOCAL: Auditório 2 do IB
TÍTULO:

ANÁLISE FUNCIONAL DE PROMOTORES DE Pleurotus ostreatus E SUA APLICAÇÃO NA ENGENHARIA METABÓLICA PARA BIOSSÍNTESE DE CANABINOIDES

PALAVRAS-CHAVES:

Regulação transcricional, Elementos cis regulatórios; Basidiomicetos; Expressão heteróloga; Gene repórter (gfp); Biologia sintética fúngica

PÁGINAS: 95
RESUMO:

A regulação transcricional é um componente essencial para a previsibilidade e eficiência de sistemas de expressão heteróloga e estratégias de engenharia metabólica. Em fungos basidiomicetos, entretanto, a caracterização funcional de promotores gênicos permanece incipiente, limitando o desenvolvimento de ferramentas moleculares adequadas para modulação controlada da expressão gênica. Neste contexto, este projeto tem como objetivo caracterizar promotores endógenos de Pleurotus ostreatus, estabelecendo bases moleculares e metodológicas para sua aplicação em sistemas de expressão fúngicos e, em perspectiva, para a otimização de vias metabólicas complexas. A via de biossíntese dos canabinoides é um exemplo dessa complexidade, e tem como produtos metabólitos secundários de plantas com emergente interesse. Os avanços biotecnológicos têm seguido para abordagens de produção heteróloga. De tal forma, é necessário que ferramentas de edição genética sejam investigadas, inclusive enzimas alternativas para as etapas da via, organismos de plataforma e métodos de transformação e vetorização desses organismos. Como resultados, foram identificadas e analisadas in silico regiões promotoras associadas a genes candidatos no genoma de P. ostreatus, selecionadas com base em critérios de expressão constitutiva e relevância dentro do contexto metabólico. A análise das sequências revelou arquiteturas cis-regulatórias complexas, com distribuição heterogênea de elementos clássicos de iniciação da transcrição, como TATA-box, CAAT-box e GC-box, além de múltiplos sítios putativos de ligação a fatores de transcrição. A comparação com promotores ortólogos de Saccharomyces cerevisiae evidenciou diferenças estruturais consistentes com a diversidade regulatória entre espécies, reforçando a necessidade de caracterização específica em basidiomicetos.Paralelamente, foram realizadas etapas experimentais preparatórias fundamentais para a validação funcional subsequente dos promotores. Essas etapas incluíram a padronização das condições de seleção e contrasseleção em P. ostreatus, com determinação da concentração mínima inibitória de higromicina e avaliação do uso de antibióticos para supressão de Agrobacterium tumefaciens. Adicionalmente, foi verificada a integridade estrutural do vetor pFAT-GFP por sequenciamento de longa leitura, confirmando sua adequação para ensaios de expressão gênica. Bem como, foi feita a triagem in silico de proteínas que sirvam como alternativas para enzimas que estão presentes na via dos canabinoides. Onde, parte significante foi encontrada em de P. ostreatus, ou em organismos que apresentaram estruturas homologas. Além disso, propomos a construção de uma biblioteca de engenharia genética baseada em clonagem modular para o escalonamento de transformações, a fim de otimizar a implementação da via. Em conjunto, os resultados obtidos estabelecem uma base para a caracterização funcional de promotores em Pleurotus ostreatus. As análises funcionais diretas dos promotores, incluindo ensaios com gene repórter e quantificação de expressão, constituem as próximas etapas do estudo.

MEMBROS DA BANCA:
Externo à Instituição - FERNANDO CAMPOS DE ASSIS FONSECA - IFG
Presidente - 1062841 - GABRIEL SERGIO COSTA ALVES
Interno - ***.794.351-** - JOÃO RICARDO MOREIRA DE ALMEIDA - EMBRAPA
Interno - 1661623 - RICARDO HENRIQUE KRUGER