Banca de DEFESA: PEDRO WILLIAM GOMES DE OLIVEIRA

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : PEDRO WILLIAM GOMES DE OLIVEIRA
DATA : 06/08/2026
HORA: 14:30
LOCAL: Auditório Macaúba - Embrapa Agroenergia
TÍTULO:

Engenharia genética de Komagataella phaffii para a produção de ácido xilônico

PALAVRAS-CHAVES:

Xilose desidrogenase; recombinação homóloga; expressão heteróloga; qPCR; hidrolisadolignocelulósico; bioconversão de xilose.

PÁGINAS: 135
RESUMO:

O ácido xilônico (AX) é um ácido orgânico de interesse industrial devido às suas aplicaçõespotenciais nos setores químico, farmacêutico e de materiais. Sua produção biotecnológica a partir da xilose presenteem hidrolisados lignocelulósicos representa uma alternativa sustentável aos processos químicos convencionais. Nessecontexto, a levedura Komagataella phaffii foi modificada geneticamente para produção de AX pela expressão daenzima xilose desidrogenase (XDH) de origem bacteriana. Embora a linhagem obtida produza AX, a eficiência deprodução pode ser aumentada por mudanças na estratégia de expressão do gene heterólogo envolvido na conversãoda xilose. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito de diferentes promotores constitutivos (GAP, TEF1 eGCW14) e de distintos loci de integração genômica (ENO1 e NTS) sobre a abundância relativa da sequência do genexylB no genoma, que codifica a XDH. As sete linhagens obtidas foram cultivadas em frascos Erlenmeyer contendo meiomineral sintético suplementado com 20 g/L de glicose e 40 g/L de xilose, bem como em hidrolisado lignocelulósico decana-de-açúcar 30% (v/v). Os experimentos fermentativos demonstraram diferenças entre as linhagens quanto àprodução de AX, produtividade, produtividade específica e rendimento, tanto em meio sintético quanto em hidrolisadolignocelulósico. Foram obtidas concentrações máximas de AX de 16,71 ± 1,02 g/L (linhagem KpENO-GCW14) em meiosintético e 4,03 ± 1,27 g/L em hidrolisado (linhagem KpENO-GAP). As concentrações de AX mais baixas foram obtidascom a linhagem KpNTS-GCW14 (0,7 ± 0,01) em meio mineral sintético e KpNTS-TEF1 (1,94 ± 0,29) em hidrolisado. Aabundância relativa do gene xylB foi determinada por PCR quantitativa em tempo real (qPCR). As diferentesconstruções genéticas resultaram em abundâncias relativas distintas do gene xylB, sendo a linhagem KpENO-GAP a queapresentou o maior valor relativo, 4.111 ± 0,564, enquanto NTS-GCW14 apresentou a menor abundância relativa, 0,089± 0,018. As construções integradas no locus ENO1 apresentaram, em geral, maiores abundâncias relativas da sequênciaxylB do que aquelas integradas no locus NTS. A integração dos resultados moleculares e fenotípicos indicou quemaiores abundâncias relativas de xylB nem sempre estão associadas ao aumento da produção de AX e da eficiênciafermentativa, pois foi observado que essa relação não foi estritamente linear, evidenciando a influência de fatoresmoleculares, metabólicos e das condições de cultivo sobre o desempenho das linhagens. Entre as estratégias avaliadas,a combinação do promotor GAP com a integração no locus ENO1 apresentou o desempenho mais promissor nascondições avaliadas, especialmente durante o cultivo em hidrolisado lignocelulósico, constituindo uma alternativa parao desenvolvimento de linhagens mais eficientes destinadas à conversão biotecnológica de hidrolisados lignocelulósicosem AX.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - ***.794.351-** - JOÃO RICARDO MOREIRA DE ALMEIDA - EMBRAPA
Externa à Instituição - LUÍZA CESCA PIVA - EMBRAPA
Externo ao Programa - 2122537 - MARCELO DE MACEDO BRIGIDO - nullExterno à Instituição - MARCIANO REGIS RUBINI - EMBRAPA