Banca de DEFESA: Kaio Luís da Silva Bentes

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : Kaio Luís da Silva Bentes
DATA : 19/12/2025
HORA: 14:00
LOCAL: Plataforma Teams
TÍTULO:

Estudo das Interações Moleculares de microRNAs e de Proteínas Salivares de Rhodnius spp., Vetores da Doença de Chagas

PALAVRAS-CHAVES:

Expressão heteróloga, serino protease, lipocalina, inibidor de protease, hematofagia vetorial, miRNoma, leucotrienos.

PÁGINAS: 98
RESUMO:

Os triatomíneos são vetores de Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas. A saliva desses insetos desempenha um papel essencial na modulação da hemostasia e na facilitação da transmissão do parasito ao hospedeiro vertebrado. Aspectos fundamentais da biologia molecular desses vetores ainda permanecem pouco explorados, incluindo dados sobre microRNAs (miRNAs) e a caracterização funcional de proteínas salivares bioativas. Nesse contexto, esta tese teve como objetivos gerais mapear e descrever o perfil de miRNAs expressos nas glândulas salivares, hemolinfa e intestino de Rhodnius prolixus; e realizar a caracterização estrutural e funcional de uma lipocalina salivar, denominada Neglectina, e de um inibidor de serino-protease do tipo Kazal (RnKazalSPI) de Rhodnius neglectus. Para alcançar o primeiro objetivo, foi realizado o mapeamento do miRNoma dos três tecidos de R. prolixus, e identificados 52 miRNAs maduros previamente descritos em Ecdysozoa, dos quais 39 apresentaram expressão ubíqua. Adicionalmente, foram preditos 112, 73 e 78 novos miRNAs no intestino, hemolinfa e glândulas salivares, respectivamente. Análises in silico indicaram que os oito miRNAs mais expressos nas glândulas salivares potencialmente interagem com genes humanos expressos no sangue, sugerindo que R. prolixus possa modular a expressão gênica do hospedeiro no local da picada. Para alcançar o segundo objetivo, foi realizada a caracterização bioquímica e funcional de duas proteínas salivares de R. neglectus. A Neglectina, um lipocalina, foi expressa em células HEK293 (Expi293) e purificada por cromatografia de afinidade e exclusão de tamanho. Embora proteínas semelhantes em outros triatomíneos atuem como anticoagulantes, a Neglectina não inibiu a coagulação sanguínea (TP, TTPa ou recalcificação do plasma), indicando outra possível função anti-hemostática. Ensaios de ligação por calorimetria de titulação isotérmica e ressonância plasmônica de superfície revelaram afinidade nanomolar seletiva da Neglectina por leucotrienos (LTB4, LTC4, LTD4 e LTE4) e ácido araquidônico. Funcionalmente, a proteína foi capaz de inibir o extravasamento do plasma e o recrutamento leucocitário, sugerindo um papel na neutralização de mediadores pró-inflamatórios e pró-hemostáticos durante o repasto sanguíneo. Por fim, a proteína RnKazalSPI foi expressa em Escherichia coli e purificada por cromatografia de afinidade e de troca iônica. Embora inibidores do tipo Kazal de outros triatomíneos apresentem afinidade por trombina, fatores XIIa e Xa, plasmina e tripsina, o RnKazalSPI não inibiu a coagulação sanguínea nem se ligou às proteases testadas,sugerindo que desempenhe uma função anti-hemostática distinta da clássica observada em outros membros da família. Este trabalho é o primeiro a descrever o perfil de miRNAs em diferentes tecidos de R. prolixus, além de apresentar a expressão e caracterização de uma proteína salivar de R. neglectus.

MEMBROS DA BANCA:
Externo à Instituição - LUCAS TIRLONI
Externo à Instituição - GINA PONTES
Interna - 2088007 - CARLA NUNES DE ARAUJO
Externa ao Programa - 1930428 - FLAVIA DA SILVA NADER MOTTA - nullInterno - 2376346 - OTAVIO DE TOLEDO NOBREGA