Banca de DEFESA: Caterynne Melo Kauffmann

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : Caterynne Melo Kauffmann
DATA : 21/02/2025
HORA: 08:30
LOCAL: Auditório do instituto de ciências biológicas
TÍTULO:

Pepper ringspot virus: Estudo da resposta imune em Nicotiana benthamiana e utilização como vetor para produção de antígeno específicos contra Coguvírus

PALAVRAS-CHAVES:

Melancia, sorologia, clone infeccioso, imunidade inata, morte celular programada

PÁGINAS: 50
RESUMO:

Os vírus Coguvirus citrulli e Coguvirus henanense (WCLaV-1 e -2), membros do gênero Coguvirus, foram recentemente relatados em melancia no Brasil em infecção mista com Orthotospovirus arachianuli (groundnut ringspot virus, GRSV) (Maeda et al. 2021). Os sintomas observados em plantas de melancia infectadas com WCLaVs e GRSV são amarelecimento, enrolamento. Tem-se poucas informações sobre da doença no país, como perdas de produção, outros hospedeiros importantes economicamente e o vetor de transmissão. Este projeto tem como objetivo desenvolver métodos de detecção sorológico para WCLaV-1 e -2 e elucidar a habilidade de transmissão por semente e sublocalização celular. Os trabalhos já estão em fase de finalização. Os anticorpos policlonais contra WCLaV-1 e -2 foram produzidos usando as proteínas do nucleocapsídeo (N) do WCLaV1 e WCLaV-2 geradas transientemente em plantas de Nicotiana benthamiana usando o vetor viral pepper ringspot virus (PepRSV). Essas proteínas foram injetadas em coelhos e os antissoros resultantes foram avaliados. A especificidade foi confirmada por ensaio de “dot-imunobinding assay” (DIBA), “antigen-coating ELISA”, “tissue blot immunobinding assay” (TBIA) e Western blot, sendo que esses anticorpos poderão ser utilizados para testes de detecção e estudo de interação dos coguvírus com plantas. Foi demonstrado que WCLaV-1 apresentou 93,1% de transmissão por semente de melancia da cultivar 'Crimson Sweet', enquanto WCLaV-2 mostrou apenas 17,8%, confirmadas por teste sorológico. A análise de tecido infectado por TBIA indicou a presença de WCLaV1 nas sementes e plântulas. A proteína N de WCLaV-1 foi principalmente detectada no citoplasma dos tecidos da semente e, notavelmente, também foi encontrada no núcleo das células da ponta da raiz, em observações realizadas por microscopia confocal. O clone infeccioso de PepRSV, que possui 2 segmentos genômicos (RNA1 e RNA2), ambos estão clonados no vetor binário pJL89. Geralmente, o clone infeccioso de PepRSV causa infecção sistêmica em plantas de Nicotiana benthamiana quando infiltrado via Agrobacterium tumefaciens. Além disso, pode ser utilizado como vetor viral para expressão heteróloga, substituindo o gene da capa proteica (CP) do PepRSV pelo gene de interesse. Os antígenos da proteína N dos WCLaV-1 e -2 foram produzidos dessa forma neste trabalho. Ao longo do estudo do vírus PepRSV, foi obtido um clone mutante, denominado clone 4, do RNA2 que possui uma mutação atípica, isto significa a inserção de uma citidina na extremidade 3’ do gene da CP. Quando o clone 4 foi inoculado em N. benthamiana em conjunto com o RNA1 de PepRSV, houve a produção de sintomas de lesão necrótica local (hypersensitive reaction-like ou HR-like) na folha inoculada. Em contraste, outro clone do RNA2, denominado clone 2, que apresenta sequência genômica tipo selvagem (sem ocorrência de mutação), nas mesmas condições causa infecção sistêmica não causando lesão necrótica local. Para compreender o mecanismo de indução de resposta HR-like pelo clone 4, elaborou-se um estudo para compreender a função dessa região genômica na resposta de defesa de Nicotiana bethamiana contra a infecção do PepRSV. O objetivo deste estudo é avaliar a ativação de espécies reativas de oxigênio (com ênfase em peróxido de hidrogênio), formação de calose e monitorando a expressão de cada gene indicadores por RT-qPCR, quando o clone 4 é agroinfiltrado em N. benthamiana. Com esses resultados, será possível direcionar a compreensão de quais mecanismos podem estar associados ao sintoma de lesão necrótica local ou ativação, inibição ou sinergismo das vias de defesa PTI e ETI.

MEMBROS DA BANCA:
Externa à Instituição - ALESSANDRA DE JESUS BOARI - EMBRAPA
Externo à Instituição - CRISTIANO LACORTE - EMBRAPA
Externa à Instituição - MARILIA SANTOS SILVA PATRIOTA - EMBRAPA
Externo ao Programa - 3301340 - NICOLAU BRITO DA CUNHA - nullPresidente - 1623558 - TATSUYA NAGATA